BK-FL正置熒光顯微鏡是利用特定波長的光照射被檢物體產生熒光進行鏡檢的顯微光學觀測技術。近年來，由于免疫熒光在醫學研究、診斷領域里的廣泛應用，FISH、綠色熒光蛋白(GFP)技術分別在基因組學、蛋白質組學研究方面的推廣，顯微照相、數字CCD成像技術的輔助驅動，賦予這一傳統技術更新的應用價值和生命力。
 

　　熒光現象有兩種：一次熒光現象，又稱“固有熒光”或“自發熒光”，是指經照射后，就能發出熒光的物質，此類物質的化學特征是發光分子具有共軛雙鍵，π電子活動性大。二次熒光現象，又稱“繼發熒光”，物質經照射后不能或只能部分發生微弱的熒光，這樣就需先用熒光色素標記處理，將熒光色素標記結合插入到不發光的活性分子中去，再經照射才能發生熒光。熒光色素應具備的基本條件是能與不發光分子的某個區域有特異性的牢固結合，同時不會影響被結合分子的結構和特性，光量子效率應≥013。
 

　　BK-FL正置熒光顯微鏡標本制作特點和觀察要求
 

　　(1)載玻片：載玻片厚度應在0.8―1.2mm之間，玻片太厚吸收光多，激發光難以在標本上聚集。載玻片必須光潔，厚度均勻，無明顯自發熒光。有時需用石英玻璃載玻片。
 

　　(2)蓋玻片：蓋玻片厚度應約0.17mm，光潔。為加強激發光，也可用干涉蓋玻片，這種特制蓋玻片的表面鍍有若干層對不同波長的光起不同干涉作用的物質(如氟化鎂)，它可以使熒光順利通過而反射激發光，這種反射的激發光可激發標本中的熒光。
 

　　(3)標本：組織切片或其他標本不能太厚，一般以5～20pm為宜，切片太厚可使激發光大部分消耗在標本下部，而物鏡直接觀察的標本上部不能被激發。切片折疊或雜質過多均可影響熒光的觀察。
 

　　(4)封片劑：封片劑必須無自發熒光、五色透明。加上抗淬滅劑后再用指甲油將蓋玻片四周封固，既保持蓋玻片不滑動，又能防止抗淬滅劑蒸發。在沒有抗淬滅劑的情況下，也可使用含30%甘油的PBS，還可用甘油與0.5mol/L碳酸鹽緩沖液(pH 9.0～9.5)等量混合液作封片劑。
 

　　(5)鏡頭的清潔：在油鏡使用完畢后，需用擦鏡紙沾上無水乙醇或3：7的醇醚混合液輕輕擦拭。
 

　　(6)及時觀察：標本染色后應及時觀察，因時間過長熒光會逐漸減弱。若標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間。